تست HPLC چیست؟
معمولا تست HPLC در موارد آزمایشگاهی کاربرد دارد. زیرا به عنوان یکی از روش های تشخیص، اندازه گیری مواد شیمیایی و جداسازی محسوب می شود. تست HPLC همان کروماتوگرافی مایع با کارآیی بالاست و یک تکنیک پیشرفته به شمار می رود. در این مطلب قصد داریم به تعریفی از این تست، مزایای آن و بررسی دستگاه HPLC بپردازیم.
تست HPLC
تست HPLC که از تکنیک های تشخیص، جداسازی و اندازه گیری مواد شیمیایی محسوب می شود در محیط های آزمایشگاهی کاربرد وسیعی دارد. هنگامی از این تست استفاده می شود که تشخیص و جداسازی مواد شیمیایی با سایر روش ها امکان پذیر و قابل اندازه گیری نیست. تست HPLC که به نام ” کروماتوگرافی مایع با کارآیی بالا ” نیز معرفی می شود در سنجش سطح خونی داروها برای سازگاری با بدن بیمار مورد استفاده قرار می گیرد. همچنین اندازه گیری سایر فاکتورهای خونی مانند آمینواسیدها به منظور تشخیص بیماری های متابولیک همچون هموسیستونوری و فنیل کتنوری نیز بکار می رود. اگر بیماری های متابولیک دیر تشخیص داده شوند و اقداماتی درمانی به موقع انجام نشود اثرات سوء و مادام العمر در بدن بیمار به جا خواهد گذاشت که درمان آن ممکن نخواهد بود.
HPLC از دوفاز تشکیل شده که شامل ثابت و متحرک می باشد. فاز جامد همان مواد متراکم شده درون ستون می باشد اما فاز متحرک، مایع است. تست HPLC می تواند با کمک گرفتن از فاز متحرک یا مایع، ترکیبات یک مخلوط را بر روی فاز ثابت جدا کند. در آغاز کار، شاهد حل شدن ترکیبات در یک حلال هستیم. پس از آن در یک ستون کروماتوگرافی جریان پیدا می کنند و به این ترتیب از یکدیگر جدا می شوند.
در این تست انتخاب حلال ها و فازهای ثابت از اهمیت زیادی برخوردار است. زیرا می تواند باعث ایجاد تغییر بین کنش ترکیبات با فازهای متحرک و ثابت شود.
برای ارائه خدمات معتبرسازی و احراز کیفیت با ما در ارتباط باشید
چرا تست HPLC بسیار کارآمد است؟
سوالی که در این بخش به آن پاسخ می دهیم این است که چرا HPLC به عنوان یکی از کارآمدترین روش ها در مقایسه با سایر روش های جداسازی مورد استفاده قرار می گیرد؟ در جواب باید بگوییم که میزان حساسیت این تست بسیار بالاست و سرعت سازگاری آن به منظور اندازه گیری های کمی زیاد است.
HPLC به عنوان یک فرآیند جذب سطحی پویا نیز شناخته می شود. زیرا زمانی که مولکول های ماده تحت آزمایش قرار می گیرند از میان دانه های متراکم ستون شروع به حرکت می کنند و به طور سطحی جذب می شوند. مهم ترین و موثرترین میان کنش ها در جداسازی فاز معکوس شامل میان کنش های قطبی، یونی و آبگریز می باشد که سبب بازداری ترکیبات خواهند شد. به همین دلیل می توان گفت که هر کدام از میان کنش ها با سایر میان کنش های دیگر رقابت می کند.
مزایای تست HPLC چیست ؟
– استفاده از HPLC بسیار آسان است و مراحل پیچیده و زمان بر ندارد. به همین دلیل وسعت کاربرد آن نسبت به سایر تست ها بیشتر است.
– مدت زمانی که برای اجرای این تست و کسب نتیجه از آن مورد نیاز می باشد بسیار اندک است و برای مواقع اضطراری و اورژانسی گزینه مناسبی می باشد.
– از آنجایی که در تست HPLC در فاز قابت و متحرک با یکدیگر رقابت می کنند، آنالیز به طور دقیق تری اتفاق می افتد و احراز کیفیت نیز با اعتبار بیشتری انجام خواهد شد. اگر از این تست در حوزه دارو استفاده شود شاهد افزایش معتبرسازی دارویی و ولیدیشن دارویی خواهیم بود.
– هر کدام از ترکیبات خاص که در این روش مورد آنالیز قرار می گیرند دارای دتکتورهای ویژه ای هستند که کمیت و کیفیت نتیجه را بهبود می بخشند.
– در برخی از تست ها ترکیبات آلی ناپایدار و غیر فرار به راحتی آنالیز نمی شوند. اما در HPLC شاهد آنالیز آن ها به سادگی خواهیم بود.
– جداسازی، خالص سازی و شناسایی انواع پرونئین ها در ترکیبات دارویی و سایر ترکیبات با انجام تست PHLC به خوبی قابل انجام است.
بخش های مختلف دستگاه PHLC
مخازن حلال
در این مخزن فاز متحرک و حلال های شستشو دهنده ستون ریخته می شود و عملیات مرتبط بر روی آن ها انجام می شود.
پمپ
هنگامی که ترکیبات مورد نظر در مخزن ریخته شد باید پمپاژ آن ها انجام شود. پمپ کردن ترکیبات باید با فشار زیاد و حدود 40 مگاپاسکال انجام شود و به سمت ستون کروماتوگرافی هدایت شود. در این واحد 1 الی 4 حلال به طرف ستون پمپاژ می شود که این امر بر اساس متدهای کاری متغیر خواهد بود.
انژکتور
انژکتور یک وظیفه مهم بر عهده دارد و آن هم تزریق نمونه مورد نظر به درون حلال عبوری در دستگاه کروماتوگرافی مایع است. این قسمت از دستگاه تست PHLC از چند مسیر تشکیل شده که بین پمپ و ستون قرار می گیرند. در حین عبور حلال با فشار مورد نظر، مقدار مشخصی از نمونه به درون آن هدایت می شود. انژکتوری که در این دستگاه قرار دارد می تواند از نوع اتوماتیک باشد و به عنوان رباتیک نیز شناخته شود. انژکتورهای رباتیک می توانند تعداد بیشتری از نمونه را به درون حلال تزریق کنند و این عملیات بر اساس برنامه ای که به آن داده شده انجام می گیرد.
ستون
ستون به عنوان یکی از مهم ترین بخش های دستگاه تست PHLC محسوب می شود زیرا مرکز جداسازی اجزای نمونه می باشد. این ستون مانند ملیه ای فلزی است که با مواد نیمه تراوا پر شده است. این مواد از جنس خاک دیاتومه می باشد که دارای خلل و فرج زیاد است. حلال ها و نمونه هایی که در آن قرار می گیرند فقط با اعمال فشار زیاد از درون آن عبور می کنند.
آشکارساز
آشکارساز همان دتکتور است که می تواند غلظت نمونه را در دستگاه کروماتوگرافی مایع مورد سنجش قرار دهد. این بخش مقدار و نوع نمونه را در یک طول موج مشخص نمایش می دهد. دتکتورها دارای انواع مختلفی هستند که می توان به SPD ، RID ، RF و MS اشاره کرد.
کنترل کننده
همان طور که از نام این بخش پیداست وظیفه کنترل کردن سایر ماژول ها را دارد و ارتباط بین کامپیوتر و بخش ها را برقرار می کند. در پایان عملیات، اطلاعاتی که بدست می آید به شکل نمودار با کروماتوگراف بر روی مانیتور نمایش داده می شود.
گازگیر
قبل از اینکه حلال به درون پمپ وارد شود باید گاز، حباب و هوای موجود در آن زدوده شود. این مرحله به دو روش از جمله تزریق گاز آرگون و استفاده از دستگاه گازگیر انجام می شود. امروزه استفاده از دستگاه گازگیر مرسوم تر است.برای معتبرسازی اتاق تمیز میتوانید در سایت ما اقدام نمایید.
